第一链 cDNA 合成试剂盒
产品名称：1st Strand cDNA Synthesis Kit 第一链 cDNA 合成试剂盒
品牌：威斯腾生物 货号：RT01
一、产品概述
本试剂盒集成了高活性逆转录酶与优化缓冲体系，并内置DNase I及gDNA Eraser Buffer，可高效去除基因组DNA污染，从源头保障实验数据的准确性与可靠性。试剂盒标配Oligo d(T)18与Random两种独立引物，支持用户根据模板特性灵活选择逆转录策略。合成的第一链cDNA纯度高、完整性好，可直接用于下游PCR或qPCR检测，无需额外纯化步骤。
二、产品核心优势
Ø 强效去gDNA污染，数据更精准：专属10×gDNA Eraser buffer搭配高活性DNase I，精准降解基因组DNA，配套EDTA终止液温和终止反应，无酶残留、无模板损伤，彻底杜绝基因组背景干扰，保障实验重复性与准确性。
Ø 双引物可选，适配全场景：同时配备Oligo d(T)18 Primer和Random Primers两种引物。Oligo d(T)适配完整带polyA尾的mRNA，特异性强；随机引物可适配残缺mRNA、非编码RNA及特殊模板，覆盖各类逆转录实验需求。
Ø 优化反应体系，合成效率高：定制化RT缓冲体系，适配逆转录酶高效反应条件，可高效催化第一链cDNA合成，产物得率高、完整性好，兼容微量RNA样本逆转录。
Ø 即用型体系，操作便捷：所有组分均为预配试剂，无需自行调配复杂体系，两步式反应流程简单易上手，大幅缩短实验耗时，新手也能快速上手操作。
Ø 兼容性广，下游适配性强：合成的cDNA产物无需纯化，可直接用于常规PCR、qPCR、基因克隆、转录组分析等各类下游分子实验，通用性极强。
三、产品规格与组分
产品规格
提供两种标准化规格，满足不同实验通量需求：20 T、50 T
试剂盒组分
组分 | 20 T | 50 T |
10×gDNA Eraser buffer | 40 µL | 100 µL |
DNase I | 20 µL | 50 µL |
RT Mix（含 RT Buffer、dNTPs、RTase、RNase Inhibitor） | 240 µL | 600 µL |
Oligo d(T)₁₈ Primers | 40 µL | 100 µL |
Random Primers | 40 µL | 100 µL |
EDTA 终止液 | 20 µL | 50 µL |
RNase-free Water | 500 µL | 1250 µL |
四、标准实验流程
1. gDNA消化
按照下表配制反应体系
组分 | 用量 |
RNA | 1 μg（注：建议范围100 ng–2 μg，按比例调整gDNA Eraser buffer和DNase I用量） |
10×gDNA Eraser buffer | 2 μL |
DNase I | 1 μL |
RNase-free Water | to 20 μL |
反应程序：37℃，30min。
终止消化：加入1μL EDTA终止液，65℃，反应10min。
2. 第一链cDNA合成
按照下表配制反应体系
组分 | 用量 |
上步反应液 | 21 μL |
RT Mix | 12 μL |
Oligo d(T)18 Primer/Random Primers | 2 μL/2 μL |
RNase-free Water | To 40 μL |
反应程序：42℃ 45 min；95℃ 5 min。
反应结束后，cDNA应立即使用或-80℃保存。
五、实验注意事项
Ø 全程严格防控RNase污染，实验耗材需无酶无菌，操作环境保持洁净，防止RNA降解。
Ø 所有试剂配制、体系操作均需在冰上进行，最大程度保留酶活性与核酸完整性。RNA样本需保证纯度高、无降解，可有效提升cDNA合成效率与实验成功率。
六、适用场景
广泛适用于基因表达定量分析（qPCR）、常规 RT-PCR、基因克隆、差异基因筛选、非编码 RNA 逆转录分析等。用于转录组测序时，请按标准文库构建流程对 cDNA 进行后续处理。
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